Tests microbiologiques

Tests de produits stériles

Les tests sont soutenus conformément aux exigences officinales harmonisées pour l’examen microbiologique des produits non stériles et les tests pour les micro-organismes spécifiés, généralement par les méthodes de filtration membranaire ou de comptage de plaques. ALS effectue des évaluations de l’adéquation des méthodes de test sélectionnées, démontrant la récupération des micro-organismes en présence du produit, avant les tests de routine.

ALS gère régulièrement un large éventail de matrices d’échantillons, y compris des antibiotiques plus agressifs, des API, des désinfectants et des formulations aqueuses chargées en conservateurs, ce qui peut nécessiter une neutralisation pour l’élimination de l’activité antimicrobienne parallèlement à la démonstration scientifique de l’absence de toxicité neutralisante. L’adéquation de la méthode de comptage doit être démontrée en présence du produit.

Toutes les installations de ALS s’efforcent d’atteindre les meilleures pratiques du secteur, incluant les recommandations énoncées dans le chapitre de la PEU, <1117> entre autres. Bien que non exhaustifs, les critères d’acceptation de recueils pour la qualité microbiologique des formes galéniques non stériles sont principalement définis par la voie d’administration soutenue par des évaluations d’impact basées sur les risques, comme indiqué dans la PEU <1111>. La nécessité de contrôles supplémentaires des micro-organismes répréhensibles doit être déterminée pour chaque produit. D’autres critères s’appliquent aux substances médicamenteuses, aux médicaments à base de plantes et aux compléments alimentaires, bien que dans tous les cas, les exigences caractéristiques comprennent :

Tests d’énumération microbienne

• TAMC (numération microbienne aérobie totale)
• TYMC (nombre total combiné de levures et de moisissures)

Micro-organismes spécifiés

• Staphylococcus aureus
• Pseudomonas aeruginosa
• Escherichia coli
• Salmonelle
• Candida albicans
• BTGN (bactéries à gram négatif tolérantes aux biliaires)
• Clostridie
• BCC (Burkholderia cepacia)

Bien que les recueils soient harmonisés pour la plupart des formes galéniques non stériles, les tests sont effectués conformément à :

• PEU ⟨61⟩ Examen microbiologique des produits non stériles : Tests d’énumération microbienne
• PEU ⟨62⟩ Examen microbiologique des produits non stériles : Tests pour les micro-organismes spécifiés
• Méthode Ph. Eur. 2.6.13 Examen microbiologique des produits non stériles
• Méthode Ph. Eur. 2.6.12 Tests d’énumération microbienne

ALS peut inclure d’autres micro-organismes spécifiés et répréhensibles dans les régimes de test, tels que les isolats issus de la surveillance environnementale, lorsque les risques connus persistent.

D’autres méthodes de test, y compris des méthodes microbiologiques rapides, peuvent être utilisées pour les tests de produits, mais nécessiteront une validation pour démontrer leur adéquation et leur équivalence aux méthodes officinales. Dans le cadre des projets techniques, ALS peut soutenir le développement et la validation de procédures alternatives.

Les déterminations de l’activité de l’eau peuvent être prises en charge par la PEU <922> et la Ph. Eur. 2.9.39.

Test d’efficacité des conservateurs

L’AET (efficacité des conservateurs antimicrobiens), également connue sous le nom de PET (test d’efficacité des conservateurs), remet en question l’efficacité du système de conservation antimicrobien dans les médicaments non stériles dans la prévention de la croissance des micro-organismes qui peuvent être introduits dans le produit pendant la fabrication ou l’utilisation du produit. 

Les tests d’efficacité des conservateurs sont requis pour toutes les formes topiques et orales hydrologiques, qui contiennent des conservateurs, et les injections conditionnées pour plusieurs doses, à savoir lorsque l’environnement du produit (p. ex. pH, activité de l’eau et technique de conservation) peut être propice à la prolifération microbienne.

Le test d’adéquation, tel que recommandé par le recueil, démontre la validité de la procédure sélectionnée en démontrant de façon expérimentale la récupération des micro-organismes cibles en présence du produit. La procédure de préparation doit éliminer l’activité antimicrobienne résiduelle du produit par dilution, filtration ou autres inactivateurs appropriés.

ALS possède une vaste expérience dans la vérification de l’adéquation des méthodes à une gamme de formulations et de systèmes de conservation, et soutient les tests d’efficacité des conservateurs par diverses approches, notamment :

• PEU <51> Tests d’efficacité antimicrobienne
• Ph. Eur. 5.1.3 - Efficacité de la conservation antimicrobienne
• ISO 11930 – Évaluation de la protection antimicrobienne d’un produit cosmétique
• Méthodes spécifiques au client et études sur mesure

Tests de produits stériles

Les tests d’endotoxines bactériennes et les tests de stérilité sont régulièrement pris en charge, ces derniers dans des environnements aseptiques strictement contrôlés, sur des eaux stériles, des médicaments et des appareils médicaux. 

Les tests d’endotoxines sont proposés en utilisant un certain nombre de méthodologies de recueils différentes, telles que celles prescrites par le chapitre de la PEU ⟨85⟩ et la méthode Ph. Eur. 2.6.14, fournissant des options pour les cas où une technique isolée peut ne pas convenir. La présence d’endotoxines dans une substance ou un produit peut être masquée ou renforcée par des facteurs interférant avec la réaction. Un test d’adéquation initial, un test pour les facteurs interférents, est régulièrement effectué sur trois lots ou préparations de produits avant les tests de routine. ALS offre :

• Une expérience significative dans la résolution de problèmes et la résolution des interférences
• La manipulation régulière des matrices d’échantillons complexes, y compris des appareils médicaux complexes
• Une compréhension approfondie et l’adoption des recueils et des directives réglementaires
• Des délais d’exécution rapides ainsi que la gestion des imprévus
• Un investissement continu dans de nouvelles technologies et de nouveaux équipements de test
• Un réseau de soutien mondial composé de microbiologistes expérimentés

Les tests d’endotoxines peuvent être effectués conformément à diverses normes et recueils :

• PEU, chapitre ⟨85⟩ Test des endotoxines bactériennes. Courant.
• PEU, chapitre ⟨161⟩ -appareils médicaux — Tests d’endotoxines bactériennes et de pyrogènes
• Pharmacopée britannique (PB). (PB) Annexe XIV C. Courant.
• Pharmacopée européenne (PE). (PE) 2.6.14. Courant.
• Pharmacopée japonaise (JP) 4.01. Courant.
• ANSI/AAMI ST72 :2011

En général, les tests de stérilité vont de pair avec les endotoxines, et sont soutenus par des méthodologies de recueils de Ph. Eur. 2.6.1, PEU, chapitre ⟨71⟩ Tests de stérilité ainsi que les normes de l’Organisation internationale de normalisation pour les appareils médicaux. La filtration membranaire est couramment utilisée lorsque les produits sont filtrables avec inoculation directe prenant en charge les produits non filtrables. Des tests d’adéquation de la méthode sont effectués pour tous les nouveaux produits et chaque fois que les conditions expérimentales changent ou varient. À l’appui de la fabrication aseptique, ALS prend également en charge les simulations de remplissage des milieux ainsi que la surveillance environnementale (voir ci-dessous).

Container Closure Integrity Testing

Container Closure Integrity Testing (CCIT) is an assay that evaluates the adequacy of container closure systems to maintain a sterile barrier against potential contaminants. Contaminants that could potentially cross a container closure barrier include microorganism, reactive gases, and other substances (USP <1207>). Container closure systems should maintain the sterility and product quality of sterile final pharmaceutical, biological, and vaccine products throughout their shelf-life (Ewan, S. et al., 2015).

Based on the drug formulation (e.g. liquid or lyophilized) and the type of the container (e.g. bottle, vial, ampule and syringe etc.) various methods can be employed to perform the container closure.

Non-destructive

• Electrical Conductivity and Capacitance Test (HVLD)
• Laser-based Gas Headspace Analysis

Destructive

• Blue Dye Ingres Leak Test
• Microbial Immersion Testing

Various CCIT techniques can be supported between ALS and our partners NUVISAN.

Particulate Testing

ALS can support particulate testing alongside microbiological testing of sterile drug products. Particulate contamination of injections and infusions consists of extraneous, mobile undissolved particles unintentionally present in the solutions. It is considered a critical risk with quality control testing commonplace throughout in-process controls and a mandatory testing requirement in release testing specifications. Particulate Contamination is predominately split into two forms: Visible and Sub-Visible. ALS commonly supports the following compendia in connection with the practical application of industry best practices:

• Ph. Eur. 2.9.20 Appendix XIII B. Particulate Contamination: Visible Particles / USP ⟨790⟩ Visible Particulates in Injections
• Ph. Eur. 2.9.19 Method I / USP General Chapter 788: Light Obscuration Particle Count Test
• Ph. Eur. 2.9.19 Method 2 / USP General Chapter 788: Microscopic Particle Count Test

Surveillance environnementale 

Des programmes de surveillance microbiologique efficaces soutiennent le contrôle microbiologique global au sein des installations de fabrication. Dans le cas d’un traitement aseptique, la surveillance des salles blanches RABS (Restricted Access Barrier Systems) et des isolateurs comprend généralement les gaz comprimés, les surfaces, l’air et tout autre matériel et équipement susceptible de produire un risque de contamination. Des exigences obligatoires sont définies pour le traitement aseptique conformément à la PEA ⟨1116⟩

Les programmes de contrôle et de surveillance microbiologique pour la fabrication non stérile ne sont pas encore aussi bien définis par les recueils ou les directives réglementaires. Dans la même lignée de celle de l’asepsie, l’étendue de la surveillance dépend de l’activité de fabrication, bien qu’elle ait tendance à être motivée par des évaluations des risques spécifiques aux circonstances avec un échantillonnage et des tests proportionnels au risque de la chaîne d’approvisionnement. Une justification scientifique solide est naturellement attendue et l’analyse des tendances des données générées aide à étayer la compréhension et l’efficacité.

ALS propose une gamme complète de tests de soutien pour les programmes de surveillance environnementale stériles et non stériles, notamment :

Incubation, énumération et reporting de :

• Plaques et bandes d’air actives
• Gaz comprimé impacté (prenant en charge les exigences de l’ISO 8573)
• Plaques de contact
• Empreintes de gant (doigts)
• Plaques de réglage (surveillance passive de l’air)

Inoculation de plaques de contrôle vierges pour la promotion de la croissance/les tests de fertilité.

Test d’eau (qualification de performance et surveillance de routine)

• Alimentation potable
• Eau purifiée (en vrac et dans des conteneurs)
• Produit utilisé
• Eau utilisée dans le processus de lavage
• Vapeur

Surveillance de surface

• Prélèvements
• Plaques de contact
• Drains

En plus des tests, ALS offre des services de conseil et soutient de manière proactive :

• Formation à l’échelle de l’entreprise aux programmes de surveillance environnementale et à leur application
• La conception et l’évaluation des programmes de surveillance microbiologique
• Évaluations des risques
• Formation et établissement de technique (par ex. sélection des milieux de culture, sélection des conditions d’incubation et meilleures pratiques d’échantillonnage)
• La validation des techniques de surveillance
• Qualification et suivi des performances par la suite
• Établissement des critères d’acceptation et définition des limites (environnements non stériles)
• Enquêtes et analyse de cause racine