Mikrobiologické zkoušky

ZKOUŠENÍ NESTERILNÍCH VÝROBKŮ

Zkoušení je podporováno v souladu s harmonizovanými požadavky lékopisů na mikrobiologické zkoušení nesterilních výrobků a zkoušky na specifické mikroorganismy, obvykle metodami membránové filtrace nebo počítání na destičkách. Společnost ALS před rutinními zkouškami provádí posouzení vhodnosti zvolených zkušebních metod, přičemž prokazuje výtěžek mikroorganismů v přítomnosti produktu. 

Společnost ALS rutinně zpracovává širokou škálu matric vzorků včetně antibiotik, léčivých látek a vodných roztoků s dezinfekčními prostředky a konzervačními látkami, které mohou vyžadovat neutralizaci za účelem odstranění antimikrobiální aktivity spolu s vědeckým prokázáním absence toxicity neutralizátoru. Vhodnost metody počítání musí být prokázána za přítomnosti produktu. 

Všechna zařízení společnosti ALS usilují o dosažení osvědčených postupů v oboru včetně mimo jiné doporučení uvedených v kapitole <1117> Amerického lékopisu (USP). Ačkoliv se nejedná o úplný přehled, kritéria přijatelnosti mikrobiologické kvality nesterilních lékových forem podle lékopisů jsou v zásadě definována cestou podání podpořenou hodnocením dopadů na základě rizik, jak je uvedeno v USP <1111>. Potřeba dodatečných kontrol sporných mikroorganismů by měla být stanovena jednotlivě pro každý výrobek. Na léčivé látky, rostlinné léky a doplňky stravy se vztahují alternativní kritéria,  v každém případě však zahrnují typické požadavky:

Zkoušky zahrnující stanovení počtu mikroorganismů 

• Celkový počet aerobních mikroorganismů (TAMC) 
• Celkový kombinovaný počet kvasinek a plísní (TYMC) 

Specifické mikroorganismy 

• Staphylococcus aureus 
• Pseudomonas aeruginosa 
• Escherichia coli 
• Salmonella 
• Candida albicans 
• Žluč tolerující gramnegativní bakterie (BTGN) 
• Clostridia 
• Burkholderia cepacia (BCC) 

Zatímco lékopisy jsou pro většinu nesterilních lékových forem harmonizovány, zkoušení se provádí v souladu s: 

• USP ⟨61⟩ Mikrobiologické zkoušky nesterilních výrobků: Zkoušky zahrnující stanovení počtu mikroorganismů 
• USP ⟨62⟩ Mikrobiologické zkoušky nesterilních výrobků: Zkoušky na specifické mikroorganismy 
• Ph. Eur., metoda 2.6.13 Mikrobiologické zkoušky nesterilních výrobků 
• Ph. Eur., metoda 2.6.12 Celkový počet mikroorganismů 

Společnost ALS je schopna do zkušebních režimů zahrnout další specifické a sporné mikroorganismy, jako jsou izoláty z monitorování prostředí, u nichž přetrvávají známá rizika. 

Pro zkoušení výrobků lze využít další zkušební metody včetně rychlých mikrobiologických metod, u nich je však potřebná validace k prokázání jejich vhodnosti a srovnatelnosti s lékopisnými metodami. V rámci technických projektů může společnost ALS poskytnout podporu při vývoji a validaci alternativních postupů. 

Při stanovení aktivity vody lze poskytnout podporu v souladu s metodami USP <922> a Ph. Eur. 2.9.39. 

Cílem účinnosti zkoušení antimikrobiálních konzervačních látek 

(Antimicrobial Preservative Efficacy – AET), které je někdy označováno také jako zkoušení účinnosti konzervačních látek (Preservative Efficacy Testing – PET) je ověřit účinnost systému antimikrobiální konzervační látky u nesterilních léků s ohledem na prevenci růstu mikroorganismů, které by se do výrobku mohly dostat během výroby nebo používání.  

Zkoušení účinnosti konzervačních látek je vyžadováno u všech vodných lokálních a perorálních forem, které obsahují konzervační látky, a u injekcí v baleních pro více dávek, jmenovitě tam, kde prostředí výrobku (např. pH, vodní aktivita a postup konzervace) může být příznivé pro množení mikroorganismů. 

Zkoušení vhodnosti, jak doporučují lékopisy, prokazuje validitu zvoleného postupu experimentálním prokázáním výtěžku cílových mikroorganismů přítomných v produktu. Postup přípravy by měl odstranit zbytkovou antimikrobiální aktivitu přípravku ředěním, filtrací nebo jinými vhodnými inaktivátory. 

Společnost ALS disponuje rozsáhlými zkušenostmi s ověřováním vhodnosti metod pro celou řadu formulací a konzervačních systémů a podporuje zkoušení účinnosti konzervačních látek s využitím různých přístupů včetně: 

• USP <51> Zkoušení antimikrobiální účinnosti 
• Ph. Eur. 5.1.3 - Účinnost antimikrobiální konzervace 
• ISO 11930 – Hodnocení antimikrobiální ochrany kosmetického výrobku 
• Specifické metody klientů a studie prováděné na míru 

ZKOUŠKY STERILNÍCH VÝROBKŮ 

Běžně je zajišťováno zkoušení na bakteriální endotoxiny a zkoušky sterility, které probíhají v přísně kontrolovaném aseptickém prostředí, se sterilní vodou, léčivými přípravky a zdravotnickými prostředky.  

Nabízené zkoušky na endotoxiny jsou založeny na řadě různých lékopisných metod, například podle USP, kapitoly ⟨85⟩ a Ph. Eur., metody 2.6.14, čímž jsou zajištěny alternativy v případě, kdy jedna izolovaná technika nemusí být vhodná. Přítomnost endotoxinů v látce nebo produktu může být maskována nebo zesílena faktory, které zasahují do reakce. Počáteční zkouška vhodnosti, zkouška na rušivé faktory, se běžně provádí na třech šaržích výrobku nebo přípravku před rutinním zkoušením. Společnost ALS nabízí: 

• Rozsáhlé zkušenosti s odstraňováním problémů a překonáváním interferencí 
• Rutinní manipulaci s komplexními matricemi vzorků včetně složitých zdravotnických prostředků 
• Komplexní porozumění a osvojení lékopisných článků a regulačních předpisů 
• Krátké termíny provedení a opatření pro nepředvídatelné události 
• Průběžné investice do nových technologií zkoušení a zkušebního vybavení 
• Podporu globální sítě zkušených mikrobiologů 

Zkoušení na endotoxiny lze provádět v souladu s různými lékopisnými články a normami: 

• USP, kapitola ⟨85⟩ Zkoušení na bakteriální endotoxiny. Platné znění. 
• USP, kapitola ⟨161⟩ Zdravotnické prostředky — zkoušení na bakteriální endotoxiny a pyrogeny 
• Britský lékopis. (BP) Příloha XIV C. Platné znění. 
• Evropský lékopis. (EP) 2.6.14. Platné znění. 
• Japonský lékopis (JP) 4.01. Platné znění. 
• ANSI/AAMI ST72:2011 

Zkoušky sterility, které jsou obvykle realizovány společně se zkouškami na endotoxiny, jsou prováděny v souladu s lékopisnými metodikami Ph. Eur., metodou 2.6.1, USP, kapitolou ⟨71⟩ Zkoušky sterility, a také v souladu s požadavky ISO na zdravotnické prostředky. Tam, kde jsou produkty filtrovatelné s přímou inokulací podporující nefiltrovatelné produkty, se běžně používá membránová filtrace. Zkoušky vhodnosti metody se provádějí u všech nových výrobků a vždy, když se změní nebo liší experimentální podmínky. V rámci podpory aseptické výroby společnost ALS rovněž podporuje simulace plnění médií a monitorování prostředí (viz níže).

INTEGRITY UZÁVĚRŮ NÁDOB 

Zkouškou integrity uzávěrů nádob (Container Closure Integrity Testing – CCIT) se hodnotí vhodnost systému uzavření nádoby s ohledem na zachování sterilní bariéry vůči potenciálním kontaminantům. Kontaminanty, které by mohly potenciálně proniknout přes bariéru uzávěru nádoby, zahrnují mikroorganismy, reaktivní plyny a další látky (USP <1207>). Systémy uzavírání nádob by měly zachovat sterilitu a kvalitu sterilních finálních farmaceutických, biologických a očkovacích přípravků po celou dobu jejich použitelnosti (Ewan, S. a kol., 2015).

Na základě lékové formy (např. tekuté nebo sušené mrazem) a typu nádoby (např. láhev, lahvička, ampule či injekce atd.) lze k uzavření nádoby využít různých metod. 

Nedestruktivní 

• Zkouška elektrické vodivosti a kapacity (HVLD) 
• Laserová analýza plynného prostoru 
• Destruktivní 
• Zkouška těsnosti průnikem modrého barviva 
• Zkoušky ponořením do mikrobiálního roztoku
• Společnost ALS ve spolupráci se svým partnerem NUVISAN je schopna nabídnout různé techniky CCIT. 

Částicové zkoušky 

Vedle mikrobiologických zkoušek sterilních léčivých přípravků je společnost ALS schopna provést i částicové zkoušky. Kontaminace injekcí a infuzí částicemi je způsobena cizorodými, pohyblivými nerozpuštěnými částicemi, které jsou v roztocích nechtěně přítomny. To je považováno za kritické riziko, přičemž zkoušení v rámci řízení kvality se běžně provádí v rámci všech výrobních kontrol a je povinným požadavkem na zkoušky uvedeným ve specifikacích pro výstupní kontrolu. Kontaminace částicemi se dělí na dvě hlavní formy: viditelnou a pod hranicí viditelnosti. Společnost ALS v souvislosti s praktickým uplatňováním osvědčených postupů v oboru běžně provádí měření na základě následujících lékopisných článků: 

• Ph. Eur. 2.9.20, příloha XIII B. Kontaminace částicemi: Viditelné částice / USP ⟨790⟩ Viditelné částice v injekcích 
• Ph. Eur. 2.9.19, metoda 1 / USP, obecná kapitola 788: Zkouška počtu částic snížením intenzity světla 
• Ph. Eur. 2.9.19, metoda 2 / USP, obecná kapitola 788: Mikroskopické stanovení počtu částic 

MONITOROVÁNÍ PROSTŘEDÍ  

Efektivní programy mikrobiologického monitorování poskytují podporu pro celkovou mikrobiologickou kontrolu výrobních zařízení. V případě aseptického zpracování platí, že monitorování vstupních bariér do čistých prostor (RABS – Restricted Access Barrier Systems) a uzávěrů obvykle zahrnuje stlačené plyny, povrchy, vzduch a další materiály a zařízení, které mohou představovat riziko kontaminace. Pro aseptické zpracování jsou podle USP ⟨1116⟩ stanoveny povinné požadavky. 

Pro nesterilní výrobu nejsou programy mikrobiologického monitorování a kontrol v lékopisech nebo regulačních pokynech dosud tak dobře definovány. Podobně jako u aseptického zpracování, i zde rozsah monitorování závisí na výrobní činnosti, i když je tendence založit jeho kontrolu na hodnocení rizik specifických pro dané okolnosti a na odběru vzorků a zkoušení úměrné rizikům dodavatelského řetězce. Přirozeně se očekává řádné vědecké zdůvodnění, zatímco analýza trendů získaných dat přispívá k lepšímu porozumění a k vyšší efektivitě. 

Společnost ALS nabízí kompletní řadu podpůrných zkoušek pro programy monitorování sterilního i nesterilního prostředí, včetně: 

Inkubace, stanovení počtu a hlášení: 

• Aktivních vzduchových destiček a pásek 
• Dotčených stlačených plynů (v souladu s požadavky ISO 8573) 
• Kontaktních destiček 
• Otisků rukavic (otisků prstů) 
• Usazovacích destiček (pasivního monitorování vzduchu) 

Inokulace prázdných kontrolních destiček pro zkoušení podpory růstu / fertility. 

Zkoušení vody (kvalifikace a běžný monitoring) 

• Pitná voda 
• Čištěná voda (volná a v nádobách) 
• Použitý výrobek 
• Voda použitá v procesu mytí 
• Pára 

Monitorování povrchů 

• Stěry 
• Kontaktní destičky 
• Odtoky 

Kromě zkoušení společnost ALS nabízí také poradenské služby a aktivní podporu v oblastech: 

• Celopodnikového vzdělávání v programech monitorování prostředí a jejich uplatňování 
• Návrhu a vyhodnocování programů mikrobiologického monitorování 
• Hodnocení rizik 
• Školení zaměřené na techniky a jejich zavádění (např. výběr kultivačních médií, výběr podmínek pro inkubaci a osvědčené postupy pro odběr vzorků) 
• Validace postupů monitorování
• Kvalifikace a následné sledování výkonnosti 
• Stanovení akceptačních kritérií a nastavení limitů (nesterilní prostředí) 
• Vyšetřování a analýza hlavních příčin